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心鈉素(ANP)放免實驗代測
原理(Principles) 本藥盒采用競爭性放射免疫分析方法。125I-ANF 標記物和血樣品(或標準品)中的 ANF 與抗體競爭性結合,加入分離劑,使復合物部分與游離抗原部分分離,棄上清,測沉淀物 的放射性計數。放射強度與抗原濃度成反比。
用途(Intended Use) 心鈉素是心房產生和分泌的一種激素,具有很強的利鈉、利尿、舒張血管和降低血壓 的作用。本藥盒采用平衡法,免疫沉淀劑分離法,測定人血漿中 ANF 的含量,用于人心血 管疾病的診斷及治療監測。
血漿及組織處理 1) 血漿樣品:采靜脈血 2 mL(空腹),置含有抗凝劑 30 μL 的試管中,立即混勻抗凝, 及時離心取出血漿,分裝–20℃保存備用。 2) 組織樣品:盡快取出動物臟器(心房、心室或其它組織)吸去血(或用生理鹽水洗 并吹干),稱重,及時放入 5 至 10 倍組織體積的冷 1N HAC,沸水浴中 10 分鐘,取出 上清液,分裝–20℃保存備用。測定時可根據組織中 ANF 含量作 1:10 – 1:1000 倍稀釋。
正常參考值(Normal Serum values) 各實驗室應根據本實驗室條件及接觸人群的不同,建立自己的正常值范圍。 下列數據僅供參考:0.379 ± 0.0766 ng/mL
數據處理(Calculation) 取三級半對數坐標紙,以 B/B0(%)為縱坐標,標準品濃度的對數為橫坐標,繪制標準曲 線;樣品以 B/B0(%)從標準曲線上查得相應的劑量,再乘以稀釋倍數,則為血漿或組織中 ANF 實際含量。也可用 Logit-log 作圖或回歸計算。
標準曲線: B (cpm) NSB (cpm) B (cpm) NSB (cpm) B/B % 0 0 管 試劑 標準 試劑 ? ? - 樣品: B (cpm) NSB (cpm) B (cpm) NSB (cpm) B/B % 0 0 管 ? 試劑 ? 樣品 - 樣品
注意事項(Attention) 1) ANF 是極易失活的多肽,在體液中的生理半衰期只有 2.5 分鐘,所組成的藥盒也相應 “嬌氣"。標準品極易吸附管壁,加入溫育液,待溶解后上下輕輕翻動,然后置 4℃冰 箱 30 分鐘后,再混勻后立即分裝加蓋或塑料袋包裝后存放于–20℃,臨用時取出。 2) 血漿或組織樣品一定要立即處理,及時分裝–20℃存放。溶血者不能使用,否則結果偏 高。 3) 標記物若要分批使用,溶解后分成幾份–20℃存放,用前取出,每份一次用完。 4) 加入分離劑后及時離心,暫不離心時可放 4℃(1 小時內離心均可以),但不宜在室溫 放置。 5) 分析管離心后棄上清所用的吸頭要,否則可能污染 ANF 分析管造成數據異常。
心鈉素(ANP)放免實驗代測