促腎上腺皮質(zhì)素釋放激素放免藥盒說(shuō)明書(shū)
CRH RIA KIT
促腎上腺皮質(zhì)激素釋放激素（CRH）由下丘腦神經(jīng)元合成，能刺激垂體促腎上腺皮質(zhì)細(xì)胞前
阿黑皮素原基因的表達(dá)和促腎上腺皮質(zhì)激素及其相關(guān)肽的合成與釋放。CRH 不僅在腦內(nèi)分布廣
泛，且人胎盤(pán)組織、羊膜、絨毛膜和蛻膜、大鼠胸腺和脾臟乃至植物血凝素刺激的人T 淋巴細(xì)
胞都可合成與分泌。人CRH 與大鼠CRH *同源，都為41 肽，與羊CRH 有7 個(gè)氨基酸殘基
不同。
試劑盒組成與配制：
1、CRH 標(biāo)準(zhǔn)品6 瓶，其濃度分別為0、1.5、5.0、15.0、45.0、135.0ng/ml。
2、125I-CRH 1 瓶。
3、CRH 抗體1 瓶。
4、緩沖液一瓶。
5、分離劑(第二抗體)一瓶。
樣本收集和提取：
1、靜脈血3ml，注入含0.5M EDTA-Na230ul 的試管中，混勻，離心，取血漿測(cè)定。
如貯于－20℃2-3 月內(nèi)測(cè)定不影響結(jié)果。
2、組織的提取：取大小適宜的組織塊，立即稱(chēng)重后于煮沸的生理鹽水（1ml）中煮
沸3 分鐘，再加1Ｎ冰醋酸0.5ml 于勻漿器中勻漿提取,再用1ＮNaOH 0.5ml 中
和，離心3000 轉(zhuǎn)/分，30 分鐘(是低溫離心)。取上清液貯存于－20℃以下
待測(cè)樣本可保留2-3 個(gè)月。
測(cè)定操作步驟：
CRH RIA 操作程序加樣單位:ul
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試劑T NSB B0 S1-S8 標(biāo)本
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緩沖液—— 200 —— —— ——
零標(biāo)準(zhǔn)—— —— 100 —— ——
標(biāo)準(zhǔn)液—— —— —— 100 ——
標(biāo)本—— —— —— —— 100
抗體—— —— 100 100 100
125I-CRH 100 100 100 100 100
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混勻，4℃ 放置24 小時(shí)
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分離劑500 500 500 500 500
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混勻，室溫放置15 分鐘，3500 轉(zhuǎn)/分離心15 分鐘。棄上清，測(cè)沉淀計(jì)數(shù)(cpm)。
結(jié)果計(jì)算：
以N/T、B/T 計(jì)算NSB、S0 結(jié)合百分率，以B/B0 計(jì)算標(biāo)準(zhǔn)及待測(cè)物結(jié)合百分率，
在半對(duì)數(shù)座標(biāo)紙上繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，并查出樣品值或由自動(dòng)Υ-計(jì)數(shù)儀器直接讀出結(jié)果。
注意事項(xiàng)：
1、本月標(biāo)準(zhǔn)品每瓶用0.8 ml 緩沖液稀釋
2、本月藥盒抗體每瓶用5.0 ml 緩沖液稀釋
3、本月藥盒標(biāo)記每瓶用5.5 ml 緩沖液稀釋
藥盒的技術(shù)指標(biāo)：
1、靈敏度:≤ 3Pg/ml。
2、重復(fù)性:批內(nèi)cv< 8％,批間cv<12％。
3、回收率:平均回收率88％。
4、正常參考值：5.1±2.1 ng/ml
本月藥盒參考數(shù)據(jù)：
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T NSB S0 S1 S2 S3 S4 S5
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CPM
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N/T% 2.1 B0/T% 35 B/ B0 % 94 82 65 38 19
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